導語

檢測任何目的(de)靶蛋白(bái)都(dōu)有¶↕(yǒu)不(bù)止一(yī)種抗體(tǐ)可(kě)供選擇，同時€✘(shí)在後繼試驗中也(yě)會(hu♠‍φδì)有(yǒu)不(bù)同的(de)檢測方案，因此在選擇二抗的(de)時(>→shí)候要(yào)綜合考慮一(yī)抗的(de)類型及​ ←後繼檢測方案的(de)要(yào)求，其中如(rú)何根據一(yī)抗的(de)種屬來(lá←¶​i)源和(hé)類型選擇二抗尤為(wèi)重要(yào)。

1. 一(yī)抗的(de)種屬來(lái)源

二抗應選用(yòng)與使用(yòng)γ•$₹的(de)一(yī)抗相(xiàng)同的(de)物(wù)種來(l≈₹♦>ái)源，例如(rú)：如(rú)果你(nǐ)的(de)一(yī¥ )抗是(shì)小(xiǎo)鼠源的(de)單克隆抗體(tǐ)，二抗則選抗小(xiǎo)鼠的‍ ‍€(de)二抗（山(shān)羊抗小(xiǎo)鼠或者兔抗小(xiǎo)鼠等均可(kě)）♠≤；如(rú)果一(yī)抗是(shì)從(cóng)兔★<血清裡(lǐ)制(zhì)備的(de)兔源​β§多(duō)克隆抗體(tǐ)，則相(xiàng)應的(de)二抗需要(y× ↔ào)選擇抗兔的(de)二抗。即根據一(yī)抗的(de)物(wù)種來(l× ¥$ái)源選擇相(xiàng)應的(de)抗該物(wù)種的(de)二抗。

2. 一(yī)抗是(shì)屬于哪個(gè)類或亞類

除了(le)要(yào)與一(yī)抗的(de)種屬來(lái≠©)源相(xiàng)一(yī)緻，二抗還(hái)需與一(yī)抗的(de)類别或亞類相(xiàng)匹配，這(zhè)通(tōng)常是(shì)針對(duì)單克隆抗體(<£Ω tǐ)而言。一(yī)般來(lái)說(shuō)多(duō)克隆抗體(tǐ)主要(yào¥♠≤)是(shì)IgG類免疫球蛋白(bái)，因此相(xiàng)應的(de)二"λ∞抗就(jiù)是(shì)抗IgG抗體(tǐ)。而單克隆抗體(t←>•ǐ)則相(xiàng)對(duì)複雜(zá)些(xiē)，由于♠← 單克隆抗體(tǐ)有(yǒu)不(bù)同的(de)類别和(hé)亞型，≤γ∑±因此相(xiàng)應的(de)二抗也(yě)需要(yào)根據這(zhè)些(xi↔→↑©ē)亞型進行(xíng)選擇。

單克隆抗體(tǐ)的(de)類别及亞類通(tōng)常會(huì)≈∑≈在産品說(shuō)明(míng)書(shū)中都(dōu)會(huì)有(yǒε↑≤σu)描述，如(rú)果您的(de)一(yī)抗是(shì)小(xiǎo)鼠IgM，那(nà≠≠∑")麽相(xiàng)應的(de)二抗就(jiù)應當是(shì)抗小(xiε↔ǎo)鼠IgG抗體(tǐ)。如(rú)果單克隆一(yī)抗是(shì)小(xi©→ǎo)鼠 IgG的(de)某一(yī)亞類（IgG1，IgG2★∑a，IgG2b，IgG3），那(nà)麽幾乎所有(yǒu)的(☆¥de)抗小(xiǎo)鼠IgG都(dōu)可(kěα↔)以與之結合，或者您也(yě)可(kě)以選擇專門(mén)針對(duì)這(zhè)一( ✘±☆yī)亞類的(de)二抗，例如(rú)，如(rú)✔↑♠ 果您的(de)一(yī)抗是(shì)小(xiǎo)鼠IgG1，>≥$那(nà)麽您可(kě)以選擇抗IgG1的(de)二抗，此種抗體(tǐ)在雙标記實 ₽♣™驗中尤其适合。在不(bù)清楚一(yī)抗為(wèi)何種類/亞類的(de)  ¥★情況下(xià)，可(kě)以選用(yòng)抗相(xiàng)應物(€λ✘ wù)種IgG，因為(wèi)此種抗體(tǐ)可(kě)以識别大(dà)多(duō✔ γ♠)數(shù)類型的(de)IgG免疫球蛋白(bái)。

3. 二抗的(de)種屬來(lái)源

一(yī)般來(lái)說(shuō)，不(bù)同的(de)種屬來(lái)源與二↓§抗的(de)質量沒有(yǒu)必然的(de)聯系，來(lái)源于山(shān)羊的(₩<de)二抗與來(lái)源于驢的(de)二抗在一(yī)般的(de≈ ✘)實驗裡(lǐ)沒有(yǒu)太多(duō)的(de)差别。然而在一(yī)些(xi© ↕ē)特殊的(de)實驗裡(lǐ)，如(rú)雙标實驗裡(lǐ)，如(rú)果其中一(yī)¥Ω←÷個(gè)一(yī)抗是(shì)山(shān)羊來(lái)源的(d¥↔±e)，一(yī)個(gè)是(shì)小(xiǎo)鼠來(lái)源​<的(de)，則相(xiàng)應的(de)二抗分(f≠§>ēn)别要(yào)抗山(shān)羊和(hé)抗小(xiǎo)鼠≤≈的(de)二抗，這(zhè)時(shí)候，二抗就(jiù‍↓€♥)不(bù)能(néng)選擇山(shān)羊或者小(♦"©→xiǎo)鼠來(lái)源的(de)。選擇相(xiàng)應的≥ →₽(de)驢來(lái)源的(de)二抗，就(jiù)非常适合做(zuò)類似雙标的(d∏♣€ e)免疫實驗。雙标得(de)2個(gè)都(dōu)抗才行(xíng)，故選擇第3個(gè)種™♠ 源的(de)抗體(tǐ)

4. 選擇哪種形式的(de)二抗，是(shì)整個(gè)IgG分(fēn)子φ≥(zǐ)，F(ab')2片段，還(hái)是(shì)Fab片段？

整個(gè)IgG分(fēn)子(zǐ)：此種抗體(tǐ)适用(yòng)于多(duō)數(shù)情況。

F(ab')2片段：該種抗體(tǐ₽↓≈)是(shì)由兩個(gè)靠二硫鍵連接的(de)用(yòng)于結合抗原的(de)Fab片段組成₽φ， 這(zhè)些(xiē)抗體(tǐ)用(yòng)在特定的(de)♣±>₽情況中，如(rú)需要(yào)避免抗體(tǐ)與具有(yǒu)Fc受體(tǐ)的(d¥↑"₽e)細胞結合的(de)情況。

Fab片段：它們隻有(yǒu)一(yī)個(gè)結合位點πσ÷¥，一(yī)般用(yòng)來(lái)封閉內(nèi)源性免疫球蛋白(bái)。

5. 二抗的(de)耦聯标記

一(yī)般來(lái)講，耦聯到(dào)二抗上(shàng)的(de)探針主要(yào)有(yǒu)酶（辣±‌♠根過氧化(huà)酶HRP和(hé)堿性磷酸酶AP或其衍生(shēn"σφg)物(wù)APAAP，PAP），熒光(guāng)基團（FITC, RRX, TR, ♦δPE）和(hé)生(shēng)物(wù)素。選用(yòng)哪種探針的(de)二抗主要(yào)☆•&取決于具體(tǐ)的(de)實驗。對(duì)₽δ$于western blot和(hé)ELISA，最常用(yòng)的(de)二抗是α"(shì)酶标二抗，而細胞或組織标記實驗（細胞免疫化(h'☆uà)學，組織免疫化(huà)學，流式細胞術(shù)）中通(tōng)常使用(y♦≠♦✘òng)熒光(guāng)基團标記的(de)二抗，免疫組化←πλ♠(huà)中也(yě)可(kě)以使用(yòng)辣根過氧化(huà)酶或堿性磷酸酶标記的(↑ de)二抗。如(rú)果想要(yào)更大(dà)程度的(de)放(fàng)大(dà)✔★檢測信号，可(kě)以使用(yòng)biotin/a↕♦§εvidin檢測系統。在一(yī)些(xiē)熒光(δ∞↕guāng)檢測方案中，則需要(yào)選擇不>≠(bù)同的(de)熒光(guāng)标記；而金(jī♠‌n)顆粒标記的(de)二抗則更多(duō)的(de)應用(yòng)于免疫電(diΩ←àn)鏡中。

6. 抗體(tǐ)的(de)純度

親和(hé)層析純化(huà)的(de)抗體(tǐ)一(yī)般更受人(rén)們歡迎，因為(≤≠ wèi)這(zhè)些(xiē)産品的(de)純度最高(gāo)，産生(shē <ng)的(de)非特異性背景最少(shǎo)。但(dàn)是(sh‌≠φ®ì)有(yǒu)些(xiē)情況下(xià)也Ω​©(yě)要(yào)考慮到(dào)純化(huà)過程中損失的(de)IgG部分(fēn&¶♥Ω)，因為(wèi)其中含有(yǒu)親和(hé)力很(hěn)高(gāo)的(d•λ₩€e)抗體(tǐ)，尤其是(shì)當目的(de)抗原存在的(de)量很(hěn)小 ™↔(xiǎo)的(de)時(shí)候，高(gāo)親和(hé)性的(de)IgG部分(fē✘↕★n)就(jiù)顯得(de)尤為(wèi)β♠≤重要(yào)。

下(xià)面總結了(le)幾種具有(yǒu)不(≠&¥bù)同特異性的(de)二抗

針對(duì)整個(gè)抗體(tǐ)分(fēn)子(zǐ)（H＋L）具↑£有(yǒu)特異性

如(rú)anti-IgG(H+L)，此類抗體(tǐ)既可(§& "kě)以與抗體(tǐ)的(de)重鏈結合也(yě)可(kě)以與✔↑♦輕鏈結合，即與抗體(tǐ)分(fēn)子(zǐ)的(de)Fc，F$£₽☆(ab')2/Fab部分(fēn)均可(kě)反應，anti- IgG(H+L±>¥)也(yě)可(kě)以與其他(tā)免疫球蛋白(bái)家(jiā)族反←$₹♦應（如(rú)IgM和(hé)IgA），因為(wèi)所有(yǒu)的(de)免疫球蛋白(bái)都(dōu)具有(yǒu≠‌)相(xiàng)同的(de)輕鏈（κ鏈或λ鏈）。

針對(duì)Fab片段具有(yǒu)特異性

這(zhè)類抗體(tǐ)與重鏈輕鏈均可(kě)以結合，由于它們可(kě)以與輕鏈反應，它們同時(shí)也(yě)可(kě)以和(hé)具有(yǒu)相(xiàng)同輕鏈的(≤‌¥↑de)其他(tā)種類的(de)免疫球蛋白(bái)反應。

針對(duì)Fc片段或重鏈具有(yǒu)特異性

這(zhè)類抗體(tǐ)和(hé)重鏈的(d↕♥×→e)Fc部分(fēn)反應，因此它們是(shì)類别特異性的(de)。即gam÷&₹÷ma鏈特異性抗體(tǐ)隻與IgG反應，mu鏈特異性抗體(tǐ)↕±γλ隻識别IgM，依此類推。

輕鏈（lambda，kappa）特異性

與所有(yǒu)類别的(de)抗體(tǐ)反應，§×✘因為(wèi)所有(yǒu)類别的(de★™↕α)抗體(tǐ)均具有(yǒu)相(xiàng)同÷←α的(de)lambda鏈或kappa鏈。×ε‍

經過吸附處理(lǐ)的(de)二抗

不(bù)同來(lái)源的(de)免疫球蛋白(bái)含有(yǒu)相(xiàng)似的(≥"de)結構，抗一(yī)個(gè)物(wù)種的(de)抗體(tǐ)φ✔→φ可(kě)能(néng)與其他(tā)物(wù)種發生(shēng)交叉反應，因此有(yǒu)♦‍∞≥些(xiē)二抗經過了(le)動物(wù)或人(rén)類IgG吸附處理£‌π(lǐ)，以減少(shǎo)非特異性背景。 例如(rú)，如(rú)果是(shì)小( ♦xiǎo)鼠的(de)組織或細胞，那(nà)麽選擇經小(xiǎo)鼠血清或IgG吸附處理(lǐ)♥₽過的(de)二抗可(kě)以減少(shǎo)非特異性結合。但ε ε(dàn)是(shì)此種抗體(tǐ)識别表位的(de)數(shù)量☆σ∞©被大(dà)大(dà)減少(shǎo)。