什(shén)麽叫Exosome（外(wài)泌體(tǐ)）

Exosome（外(wài)泌體(tǐ)）是(shì)細胞向胞外(wài)分(fēn)泌的(de)囊泡類小(xiǎo)體(tǐ)¶>✘，直徑約為(wèi)30-150 nm之間(jiān§∑)，具有(yǒu)典型的(de)脂質雙分(fēn)子(zǐ)層膜結構，可₽™®(kě)存在于細胞培養上(shàng)清液、血漿、血清、唾液、尿液、羊水($β★Ωshuǐ)和(hé)惡性腹水(shuǐ)以及其它生(shēng≈↑)物(wù)體(tǐ)液中；其攜帶有(yǒu)母細胞的(de)多(duō)種蛋白(bá‌ i)質、脂類、DNA和(hé)RNA等重要≤±σΩ(yào)信息，在細胞-細胞間(jiān)的(de)物(wù®₩©)質和(hé)信息傳遞中起重要(yào)作(zuò)用(yòng)。

外(wài)泌體(tǐ)（Exsome）發展曆程：

外(wài)泌體(tǐ)的(de)發現(xiàn)要(yào)追溯到(dào)1986年(nián)，Eberhard G. Trams和(hé)R.‌Ω£M.Johnstone在體(tǐ)外(wài)培養的(de)綿羊紅(hóng)細‌₩胞培養液上(shàng)清中發現(xiàn)了(le)一(yī)種有 ÷♣(yǒu)膜結構的(de)小(xiǎo)囊泡，并将其命名為(wèi)Eπ☆xosome（外(wài)泌體(tǐ)）。←>随後的(de)10年(nián)，外(wài)泌體(tǐ)并未受到(dào)足夠的(de)重視(‍δ shì)。直至1996年(nián)，G.Raposo發現(xiàn)類似于B淋巴細胞能(néng)分(fēn)€₽泌抗原提呈外(wài)泌體(tǐ)，這(zhè)種外(wài)泌體(tǐ)攜§≠帶MHC-Ⅱ類分(fēn)子(zǐ)、共刺激因子(z≥ε↓®ǐ)和(hé)粘附因子(zǐ)。研究表明(míng)這(zhè)種B細胞來(lái)源的(de)↑✘外(wài)泌體(tǐ)可(kě)以直接刺激效應CD4+細胞的(®‌✘de)抗腫瘤反應。1998年(nián)，L.Zitvogel等發現(xiàn)樹(≥αshù)突細胞（DC cell）也(yě)能(néng)産生(shēng)×↔₹有(yǒu)抗原提呈能(néng)力的(de)外(wài)泌體(tǐ)，而且外(wà€πφi)泌體(tǐ)含有(yǒu)功能(néng)性的(de)MHC-Ⅰ類和(hλ∑♦é)Ⅱ類分(fēn)子(zǐ)，還(hái)有(yǒu)共刺激因子(z♣♠ǐ)。這(zhè)種外(wài)泌體(t↓Ωσǐ)啓動了(le)特異性的(de)CTL殺¥ ✔≈傷作(zuò)用(yòng)，促進了(le)T細胞依賴的(de)抗腫瘤效→λ應。

2007年(nián)，H.Valadi等發現(xiàn)，細胞之‍¥間(jiān)可(kě)以通(tōng)過外(wài)泌體(tǐ)中的(σ"ε de)RNA來(lái)交換遺傳物(wù)質。這(zhè)✘☆←™意味著(zhe)細胞可(kě)以通(tōng)過外‍♠γ(wài)泌體(tǐ)影(yǐng)響另外(wài)一(yī)個(gè)細胞∑₽¶，甚至可(kě)以把自(zì)己的(de)基因強加給另外(wài)‍×一(yī)個(gè)細胞。研究人(rén)員(yuán)逐漸對(duì)小(xiǎo)☆↓小(xiǎo)的(de)外(wài)泌體(tǐ)産生(shēng)↕∏了(le)極大(dà)的(de)好(hǎo)奇。他(tā)們發現(σπ"xiàn)，腫瘤細胞的(de)外(wài)泌體(tǐ)與正常細胞的(de)外(wài)泌體↑$♠(tǐ)之間(jiān)存在差異，腫瘤的(de)外(wài)泌體(tǐ)會(huì)促進腫瘤的♦®≤(de)生(shēng)長(cháng)和(hé)轉移，腫瘤周圍組織細胞分(fēn÷≈α)泌的(de)外(wài)泌體(tǐ)具備殺傷腫瘤細胞的(de)能(néng)力，等等。201₹≥ε3年(nián)的(de)諾貝爾生(shēng)理(lǐ)$λ 或醫(yī)學獎頒給了(le)三位科(kē)學家(jiā)，他(tā×←")們分(fēn)别是(shì)美(měi)國(guó)科(kē)學家(jiā)J☆∑ames E. Rothman和(hé)Randy W. Schekman，德國(gλΩuó)科(kē)學家(jiā)Thomas C. Südhof，以表彰Ω×↔他(tā)們發現(xiàn)細胞內(nèi)部囊泡（外(wài)泌體"♥(tǐ)等）運輸調控機(jī)制(zhì)。使外(wài)泌體(tǐ)的(de)研↔" ‌究達到(dào)全新的(de)高(gāo±•φ')度。就(jiù)外(wài)泌體(tǐ)的(de)研究方向而言，♦₹>幹細胞、免疫、microRNA、靶向給藥、癌症的(de)診斷及治療等都(dōu)是(sh↓✘γì)熱(rè)門(mén)研究領域。

2015年(nián)JHuan等人(rén)證實了(le)急性髓細胞白(bái)血病（AML§☆✘γ）的(de)外(wài)泌體(tǐ)在白(bái)血病的(de)骨髓微(wēi)環境中具•≈↕有(yǒu)抑制(zhì)造血幹細胞的(de)功能(néng)。同年&≠π★(nián)WANGY等人(rén)發現(xiàn)誘導多(duō)能(néng)幹(iP★♣S)細胞的(de)外(wài)泌體(tǐ)可(kě)以在心肌細胞受到(dào)急性心肌✔Ω缺血（MIR）影(yǐng)響時(shí)↕→₩，給心肌細胞傳送保護信号。

目前，已有(yǒu)越來(lái)越多(duō)的(de)學者開(kāi)始關注外(wài)泌體(≥≈¥tǐ)在腫瘤發生(shēng)和(hé)發展中的φα(de)作(zuò)用(yòng)及其機(jī)制(zhì)，★♣外(wài)泌體(tǐ)将在癌症的(de)診斷及治療等領域發揮重要(yào)作(zuò)用×>€(yòng)。2015年(nián)德克薩斯大(dà)學MD安德森(sēn)癌症中心的"±γ•(de)一(yī)項研究在6月(yuè)24日(rì)的(de)《自(zì)然》（Na‍"σ®ture）雜(zá)志(zhì)上(shàngε₽β™)發布，研究發現(xiàn)存在于癌症外(wài)泌體(tǐ)（§↓λexosomes）上(shàng)的(d≥↔✔e)glypican-1 (GPC1)基因編€→碼蛋白(bái)，或許可(kě)以作(zuò)為(wèi)一(yī)種潛在σ↑<非侵入性診斷和(hé)篩查工(gōng)具的(de)組成部分(fēn)，¥β≥用(yòng)來(lái)檢測有(yǒu)可(kě)能(néng)尚處于适合手術(shù)治<∏療階段的(de)早期胰腺癌。研究發現(xiàn)，在胰™∞™腺癌小(xiǎo)鼠模型還(hái)未顯示出MRI可(kě)以∞ 檢測到(dào)的(de)胰腺疾病迹象之時(sh>σ ≤í)，GPC1+ crExos就(jiù)檢測到(dào)了(le)胰腺癌的(de)可(kě) β ≥能(néng)性。相(xiàng)比常用(yòng)的(de)CA 19-9生(shē™₹ng)物(wù)标志(zhì)物(wù)，GPC1'ε→+ crExos似乎是(shì)一(yī)種更可(kě)靠的(de)篩查工(gōng♦>‌€)具。

“不(bù)同于循環腫瘤細胞(CTCs)需要(yào)大(dà)量的(d♣←<¶e)新鮮血液，在大(dà)約30年(nián)前保存到(dào)冷(lěng)凍♦β₽φ庫的(de)血液樣本中也(yě)可(kě)以檢測和(hé)分(fēn)離(lí)出GPC↑$σ>1+ crExos。可(kě)以從(cóng)儲存樣本分(fēn)♦¶離(lí)出的(de)癌症外(wài)泌體(tǐ)中提取出DNA、RNA和(hé)蛋白(bái)♣λ∏₩質，用(yòng)于進一(yī)步的(de)遺傳和(ε★hé)生(shēng)物(wù)分(fēn)析。因¶¥此，癌症外(wài)泌體(tǐ)不(bù)僅僅是(shì)一(yī)種生(shēng)≤→±物(wù)标記物(wù)，分(fēn)離(lí)出它們還(hái)×® 可(kě)為(wèi)我們提供一(yī)個(gè)癌症特異性信息的(de)寶庫。”由于胰腺癌确診®₽¶♦時(shí)常常已到(dào)晚期，隻有(yǒu)15%的(de)患者适合于接受手術(sδ₹hù)。如(rú)果能(néng)夠早期檢測到(dào)癌症，就(jiù)可(kě)以采用(yò↑ ng)胰十二指腸切除術(shù)來(lái)治療胰腺癌患者。

目前有(yǒu)關外(wài)泌體(tǐ)的(de)研究☆♠≈，主要(yào)集中在外(wài)泌體(tǐ)顆粒的(de)提取、純化(huà↓‌∞ )和(hé)內(nèi)容物(wù)分(fēn)析上(shàng)。其λ≥ε≈中，外(wài)泌體(tǐ)的(de)粒徑表征和(hé)濃度信息是(shì)極為(wφλ‍πèi)重要(yào)的(de)參數(shù)。    

外(wài)泌體(tǐ)的(de)分(fēn)離(lí)

目前，外(wài)泌體(tǐ)的(de)分(₩λfēn)離(lí)多(duō)采用(yòng)超速離(lí)心、♣​>¶磁珠免疫捕獲、沉澱或過濾三種方法。

超速離(lí)心：耗時(shí)耗力，往往需要(yào)8-30個(→∏‍gè)小(xiǎo)時(shí)；每次最多(du✔♠÷♦ō)隻能(néng)處理(lǐ)6個(gè)樣品；需要(y←×ào)大(dà)量的(de)起始材料；産量不(bù)高(gā₽λ&→o)。需一(yī)台超速離(lí)心機(₽∏jī)。

磁珠免疫捕獲：利用(yòng)外(wài)泌體(tǐ)表面特有(yǒu)的(de)表面标記✔​​λ物(wù)（如(rú)CD63、CD9蛋白(bái)），用(yòng)包被抗‌♦§标記物(wù)抗體(tǐ)的(de)磁珠與外(w↓×♠ài)泌體(tǐ)囊泡孵育後結合，即可(kě)将外(wài)泌體(tǐ)吸附并分(fēn)離(l'γí)出來(lái)。磁珠法具有(yǒu)特異性高(♣¥gāo)、操作(zuò)簡便、不(bù)影 ¶₩×(yǐng)響外(wài)泌體(tǐ)形态完整等優點，但(d&<àn)是(shì)效率低(dī)，外(wài)泌體(tǐ&↕  )生(shēng)物(wù)活性易受pH和(hé)鹽濃度影(yǐng)響，不(bù‌× ε)利于下(xià)遊實驗，難以廣泛普及。

外(wài)泌體(tǐ)分(fēn)離(lí)：↕'φ

通(tōng)過簡單離(lí)心，從(cóng)體(tǐ)液'↕★≤、血液、尿液、細胞中分(fēn)離(lí)外(wài≥÷™)泌體(tǐ)（Exosome），相(xiàng)比超速離(lí)心，安全、快(kuài)♠™≥速，經過兩次柱子(zǐ)純化(huà)，很(hěn)好(hǎo♠‍®)的(de)去(qù)除了(le)白(bái)蛋白(bái)，從(cóng)而獲得(de)高≠✘(gāo)純度和(hé)高(gāo)産量的(de)外(wài)泌體(t‍♦ǐ)。

外(wài)泌體(tǐ)RNA/蛋白(bái)的(de)分(fēn)析

目前，通(tōng)常使用(yòng)組織診斷法進行(xíng)癌症檢測，如(rú≤Ω•)熒光(guāng)原位雜(zá)交（FISH）和(hé)免疫組織化(huà)學（IHC）。但(<≠≠dàn)是(shì)這(zhè)樣基于組織診斷的(de)方法具有(yǒu)很(hěn) ∏×大(dà)的(de)局限性，因為(wèi)需要(yào)較大(dà)量的(de)組織樣本↓€，其不(bù)能(néng)對(duì)癌症變化(huà)進行(xíng)實時(shδπí)監控，不(bù)能(néng)準确地(dì)反映當前的(de)疾病狀态。而外(λ∏λwài)泌體(tǐ)診斷測試通(tōng)過從(cóng)尿液、♠±±血液和(hé)體(tǐ)液中提取的(de)外(wài)泌體(tǐ)獲得(de)遺傳信。Ex≠™©osomes是(shì)由所有(yǒu)含RNA、DNA和(hé)蛋白(bái)的(de)活細胞λ≠×釋放(fàng)的(de)信使。因為(wèi)Exosome包含來(lái)源于母細胞 π的(de)信息，因此在腫瘤學上(shàng)，基于外(wài)泌體(tǐ)的(de)體(tǐ)↕✔→液活檢對(duì)整個(gè)腫瘤活動提供了(le)一(yī)個(gè)實時(∑♣∑shí)監控并可(kě)對(duì)疾病的(de)重要(yào)變化(huà)進行(x₹¥λíng)檢測。

2016年(nián)1月(yuè)21日(£ ₹rì)，ExosomeDiagnostics的(d↕•αγe)ExoDx Lung(ALK)通(tōng)過了(le)美(měi)國(guó)食品藥品監督管‌&₩理(lǐ)局(FDA)認證，成為(wèi)世界上(sh↕¥α≈àng)首款癌症臨床診斷産品，并于美(měi)國(guó)'‍×★市(shì)場(chǎng)率先銷售。