是(shì)不(bù)是(shì)細胞污染？是(s™‌↕hì)哪種細胞污染？如(rú)何識别？

細菌污染

細胞中如(rú)果污染細菌，最常見(jiàn)的♦←↔(de)有(yǒu)枯草(cǎo)杆菌等革蘭陽性菌以及大(dà)腸杆菌、假單孢菌等革蘭™<陰性菌，其中又(yòu)以白(bái)色葡萄球菌較常見↔α(jiàn)。培養細胞受細菌污染後，會(huì≤☆"Ω)很(hěn)快(kuài)出現(xiàn)培養液變混濁，pH 改變。

也(yě)有(yǒu)少(shǎo)數(shù)培養液肉眼觀察無多(duō)少(sh™✘<¥ǎo)改變，隻能(néng)在鏡下(xià)發現(xiàn)菌Ω ↔¥體(tǐ)才知(zhī)污染。所以，每天應仔細觀察。污染後細胞發生(shēng✘")病理(lǐ)改變，胞內(nèi)顆粒增多(duō)、增粗，最後變圓脫落死亡，造成實驗失敗和(h ±é)細胞株(系)丢失。

細菌在普通(tōng)倒置顯微(wēi)鏡下(xià)為(wèi)黑(hēi)♠¥色細沙狀，根據感染細菌的(de)不(bù)同，可(kě)有(yǒ↑₽♥ u)不(bù)同的(de)外(wài)形，培養液一(y↑≥•≈ī)般會(huì)渾濁變黃(huáng)，對(€₹₹duì)細胞生(shēng)長(cháng)影(yǐn∏♣&₹g)響明(míng)顯。

如(rú)何預防

●仔細檢查一(yī)下(xià)器(qì)皿的(de)滅菌情況，是(shìφ±↔™)否在高(gāo)壓滅菌時(shí)放(fàng)氣時(shí)間(jiān)足夠、壓力≥←足夠。

●重點檢查和(hé)儲存培養液接觸的(de)移液管等物(wù)品，連續兩次污染的(d✘♦±e)話(huà)有(yǒu)可(kě)能(néng)造成儲存液污染，一λα(yī)定要(yào)注意。

●下(xià)次使用(yòng)前檢查一(yī)下(xià)培養液是(shì)否存在渾濁✔>≈的(de)現(xiàn)象，可(kě)在培養液中加相(xiàn£₩g)應的(de)抗生(shēng)素處理(lǐ)。

白(bái)色念球菌污染

革蘭氏染色陽性，中間(jiān)長(cháng)梭型的(de)₹≥₩₩是(shì)正在分(fēn)裂的(de)念珠菌

黴菌污染

黴菌污染以後，培養液是(shì)清亮(liàng)的(de)∏♦，倒置顯微(wēi)鏡下(xià)無雜(zá)質，37 度孵箱培養 2-3 天，仍♥₹Ω清亮(liàng)，但(dàn)出現(xiàn)♦∏≥絮狀雜(zá)質。鏡下(xià)可(kě)見(j>♣₹•iàn)呈細絲狀的(de)團狀漂浮物(wù)，可(kě)看(kàn)到(dào)明(φ™•míng)顯的(de)菌絲，細胞仍可(kě)生(shγ≈×ēng)長(cháng)，但(dàn)時"£(shí)間(jiān)長(cháng)之後，細胞的(de) ↓活力狀态變差。

用(yòng)硫酸銅溶液擦拭 CO2 孵箱內(nèi)，再把水(&÷ shuǐ)盤裡(lǐ)也(yě)加上(shàng)飽和(hé)量的(de)硫酸銅。或者在培養箱的λ✔≥(de)托盤加入飽和(hé)的(de)消毒磷酸氫二鈉高(gāo)鹽液體(tǐ±<λ), 可(kě)以防止黴菌污染。

CO2 孵箱被黴菌污染後，可(kě)把所有(yǒu)細胞暫時(shí)轉移，采用(yòng÷σ≤)過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔闆，箱壁）。并把過氧乙酸放(✔₩fàng)置在孵箱內(nèi)一(yī)個(g♠ è)小(xiǎo)時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過≤₹π♣氧乙酸的(de)氣味消散後，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2 月(yuè)左右）>↑¶δ，尤其在多(duō)雨(yǔ)的(de)季節。

其它培養箱清洗方法是(shì)：用(yòng) 84 液擦洗－清水(✔♣shuǐ)擦洗－75% 酒精擦洗－紫外(wài)燈照(zhào)。

如(rú)何預防

●可(kě)在培養基裡(lǐ)加 3u/mL 的(de)≠λλφ兩性黴素或制(zhì)黴菌素或放(fàng)線菌素 D 或雙抗。

●細胞一(yī)旦污染，很(hěn)難挽救，制(z™'hì)黴菌素或放(fàng)線菌素 D 或雙≈∑↕抗都(dōu)于事(shì)無補，建議(yì)舍棄該污染細胞。

●将環境徹底消毒，如(rú)果所有(yǒu)細→'胞都(dōu)污染，可(kě)能(néng)是σφ‌"(shì)系統污染，檢查一(yī)下(xià<&±≥)培養基和(hé)器(qì)材，如(rú)果隻是(sh≥α®ì)個(gè)别污染，可(kě)能(néng)是(shì)操作(zuò)問(wèn)•ε£題，就(jiù)要(yào)注意操作(zuò)。

內(nèi)皮細胞培養中發現(xiàn)的(de)一(yī)個(gè)黴菌

黴菌污染

上(shàng)圖是(shì)典型的(de)黴菌污染，肉眼看(kàn)到✔σ(dào)白(bái)色的(de)團塊或白(bái)點，鏡下(xià)呈絲Ω♥&§狀。400 倍圖片如(rú)上(shàng)。

支原體(tǐ)污染

支原體(tǐ)感染細胞以後，細胞病變不(bù)很(hěn)明(míng)顯，隻是(shì)慢(mε∑±àn)慢(màn)死去(qù)。培養液一(yī)般會(h↑∞uì)渾濁。

國(guó)內(nèi)血清很(hěn)多(duō)都(dōu)沒有(yǒu)做(zuò)♥≤支原體(tǐ)陰性檢測，而支原體(tǐ)是(shì)牛血清中×‌ε最常見(jiàn)的(de)微(wēi)生(shēng)物(‌δσ wù)之一(yī)。而且它不(bù)能(néng)用(yòng)過濾的(de)辦法除去(qù)。 ∏∞可(kě)用(yòng)泰樂(yuè)菌素——獸用(π>•yòng)支原體(tǐ)病的(de)藥，無任何不(bù←¥©≠)良反應。如(rú)果用(yòng)的(de)是(shì) ¶₽Sigma 公司的(de)，使用(yòng)時(shí)用(yòng) 50u g/mL "₩​≤Tylosin 培養液培養 6 天或連續傳兩代即可(kě)清除支原體(tǐ)污染。₹σ↑如(rú)果作(zuò)為(wèi)常用(yòng)的(de)抗生(shēng)素的£≠σ✔(de)話(huà), 建議(yì)用(y§$ ♠òng) 8 ug/mL 的(de)濃度。

支原體(tǐ)污染

支原體(tǐ)污染電(diàn)鏡照(zhào)片，煎蛋狀和(hé)其他(tā)形狀

真菌污染

一(yī)般培養液清亮(liàng)，不(bù)變色，鏡下(xià)有(yǒu)絲狀物(wù)，✔≈‌∏有(yǒu)些(xiē)真菌開(kāi)始很(hěn)像死細胞碎©₹φ片，隻是(shì)它很(hěn)多(duō)很(hěn)多≤§(duō)的(de)小(xiǎo)塊很(hěn)清楚，象珊瑚狀，≥≈不(bù)象細胞碎片分(fēn)不(bù)清，慢(màn)慢(màn)的(de)會(hΩ​uì)長(cháng)出很(hěn)細的(de)黑(hēi)色絲狀物(wù)&&。

真菌生(shēng)長(cháng)的(de)比較慢(màn)，不(bù)象α‍×↕細菌那(nà)麽容易被發現(xiàn)，但(dàn)是(shì)一(yī)旦發現(x≤$¥¶iàn)有(yǒu)它的(de)存在細胞就(jiù)被污染了(le)，也₩×(yě)很(hěn)難救活了(le)。

真菌污染

高(gāo)倍鏡下(xià)的(de)真菌污染

原蟲污染

培養液可(kě)輕微(wēi)渾濁，顯微(wēi)βσ→<鏡下(xià)那(nà)些(xiē)細小(xiǎo)的(de)點狀物(wù)₽ 數(shù)量非常多(duō)，輕微(wēi)活動，∏$細胞雖然可(kě)以生(shēng)長(cháng)但(dàn)繁殖速度卻明(mín↔∑g)顯減慢(màn)，而且細胞狀态不(bù)好(hǎo)，邊緣不(bù)清楚，細胞不(bùδ±✘)透亮(liàng)。他(tā)們與細胞可(kě)共生(shēng)但(dàn)會(huì)¥ 與細胞争奪營養。這(zhè)種共生(shēng)是(σ∏≥shì)非常普遍的(de)，但(dàn)他★λ (tā)們的(de)數(shù)量小(xiǎo)，細胞占優勢所以不(bù)會(huì)影(y±'↔‍ǐng)響到(dào)細胞的(de)正常生(shēng)"∑長(cháng)，隻有(yǒu)當他(tā)們到(dà εo)達一(yī)定的(de)數(shù)量時(shí)就(jiù)←✔γ☆會(huì)影(yǐng)響到(dào)細胞的(de)生(shēng)長(cháng)，​λ₩最終形成惡性循環。

污染的(de)可(kě)能(néng)原因：配液消毒問(wèn)題、操作(z↕  uò)問(wèn)題、環境問(wèn)題等等。

關于培養基的(de)無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不(bù)加細胞），37 度試培養一(yī)段λ✘±‍時(shí)間(jiān)後觀察。如(rú)→π果沒有(yǒu)細菌生(shēng)長(chá♦♠​>ng) 就(jiù)是(shì)操作(zuò)×≈¶的(de)問(wèn)題。也(yě)可(kě)以在培養基中事(shì)先加入雙抗（硫酸鏈黴 ₩↓素和(hé)氨苄青黴素）。但(dàn)雙抗有(yǒu)時(shí)會(huì)影↕←(yǐng)響細胞的(de)狀态，所以在做(zuò)轉染、檢測細£Ω$ 胞某項指标前一(yī)定要(yào)撤去(qù)雙抗，以避免影(yǐng)響實驗結果。

如(rú)何預防

●孵箱應定期用(yòng)三氧機(jī)消毒或者紫外(wài)光(π∏guāng)照(zhào)射，并用(yòng)酒精和(hé≤≈)新潔爾滅試擦孵箱，同時(shí)孵箱內(nèi)的(de)水(shuǐ)應是(shì£∞≥)三蒸水(shuǐ)。

●超淨台、取材、器(qì)材、培養液、培養瓶、操作(zuò)等因素

●超淨台的(de)風(fēng)機(jī)不(bù)能(néng)過大(dà)，風©→(fēng)機(jī)到(dào) 6-8 格。否則也(yě)可(kě)ε←<能(néng)能(néng)緻黴菌污染。

●無菌室經甲醛熏蒸消毒後，可(kě)用(‌₩™yòng)同等量的(de)氨水(shuǐ)噴灑中和(hé)，約幾小(xiǎo"∞)時(shí)即可(kě)進入操作(zuò)。

摘自(zì)：生(shēng)物(wù)學霸