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Abcam抗體(tǐ)保存指南(nán)
本指南(nán)以abcam抗體(tǐ)保存方法為αβ∞ (wèi)主,同樣也(yě)可(kě)以應用(yòng)到(dào)↔∏其他(tā)絕大(dà)部分(fēn)公司的(d<≤e)抗體(tǐ)産品!請(qǐng)不(bù€ )時(shí)核查抗體(tǐ)數(shù)據表以獲取✔≈☆ 特定保存建議(yì)。
保存溫度和(hé)條件(jiàn)
對(duì)于很(hěn)多(duō)抗體(tǐ)而言Ω ₽,分(fēn)裝成小(xiǎo)等份并凍存于-20℃或-★λ80℃是(shì)最佳保存條件(jiàn)。分(fαēn)裝成小(xiǎo)等份可(kě)最大(₽'±dà)程度減少(shǎo)由凍融造成的(de)損傷,以及從(cóng)單個(gè)試劑瓶中多↑λ∏(duō)次吸取而引入的(de)污染。小(xiǎo)等份隻需凍融一(yī)次,$₹如(rú)有(yǒu)剩餘,可(kě)将剩餘物(wù)保存于4℃。在收到(dào)抗體 (tǐ)時(shí),在10000×g下(xià)離(l£★γγí)心20秒(miǎo)以沉積截留于試劑瓶螺紋的(deφ")溶液,并以小(xiǎo)等份轉移至低(dī)蛋≤φ☆ 白(bái)結合微(wēi)量離(lí)心管中。小(xiǎo)等份的(σ'de)量取決于實驗人(rén)員(yuán)在實驗中通(tō'↑ng)常采用(yòng)的(de)量。小(xiǎo)等份應不(bù)小(xiǎo)于10μl;等♣≤&份越小(xiǎo),儲液濃度因抗體(tǐ)蒸發及吸附于保存瓶表面而受到(dào)&≠σ§的(de)影(yǐng)響越大(dà)。
在大(dà)多(duō)數(shù)情況下(xià),收到(dào)抗↕↓α體(tǐ)時(shí)在4℃下(xià)保存一(yī)至兩周,然後再冷(lěng)凍進±$§ 行(xíng)長(cháng)期保存是(shì)可(kě)以接£受的(de),但(dàn)也(yě)許腹水(shuǐ)液是(shì)Ω•例外(wài),它可(kě)能(néng)包含蛋白(bái)酶,因而應該盡快(kuà♠♦≠i)凍存。同樣,遵照(zhào)數(shù)據表上(shàng)的(de)建議(£ ♣<yì)是(shì)重要(yào)的(de♦π™)。
其他(tā)特别條件(jiàn):
(1)酶偶聯抗體(tǐ)不(bù)應凍存,而應保存于4℃。 ↓←凍融不(bù)僅影(yǐng)響抗體(tǐ)£γ€結合能(néng)力,還(hái)會(huì)降低(dī)酶活性↑↓₩•。
(2)無論偶聯至熒光(guāng)染料、酶還(hái)是(s£>hì)生(shēng)物(wù)素,偶聯抗體(tǐ)都(dōu)應保存于深色試劑瓶中或用(yòn £™g)金(jīn)屬箔包裹。暴露于光(guāng)✔∑線中将損害偶聯物(wù)的(de)活性。特别是(shì)熒光 ✔₩≥(guāng)偶聯物(wù)易受到(dào)光(guāng₽β$)漂白(bái)影(yǐng)響,在實驗的(dσ¶e)所有(yǒu)階段都(dōu)應避光(guāng)。
(3)oIgG3同型抗體(tǐ)具有(yǒu)解凍時(shí)®±×形成聚集物(wù)的(de)獨特趨勢,應始終保存于4℃。
用(yòng)疊氮化(huà)鈉防止污染
為(wèi)了(le)防止微(wēi)生(shēng)物(w&≠★ù)污染,可(kě)将疊氮化(huà)鈉加入抗體(tǐ)制(zhì)備品中達到(dào)0.02×δ'%(w/v)的(de)終濃度。很(hěnε♦↓)多(duō)abcam抗體(tǐ)已經包含這(zhèπ↓γΩ)種防腐劑,所用(yòng)濃度範圍為(wèi)0.02至 βλ0.05%。
不(bù)使用(yòng)疊氮化(huà)鈉的(de)情形:
(1)如(rú)果用(yòng)抗體(tǐ)染色或處理(lǐ)活細胞,或如(rú)果用(y±βòng)抗體(tǐ)進行(xíng)體(tǐ)內(nèi)研究,一(yī)定₽≤<要(yào)使用(yòng)不(bù)包含疊氮化(huà)鈉的(de)制(zhì)備品。該抗菌εσ↓劑也(yě)對(duì)大(dà)多(duō)數(shù™♥←₹)其它生(shēng)物(wù)具有(yǒu)毒性:它阻斷細胞色素電≈™(diàn)子(zǐ)傳遞系統。
(2)疊氮化(huà)鈉會(huì)幹擾氨基參與的(de)任何偶聯,應在偶聯進行(xíng↓↓')前除去(qù)。偶聯後,抗體(tǐ)可(kě)保存于疊氮化(huà)鈉中,除此之外↕γ(wài),0.01%硫汞撒(硫柳汞)不(bù)含伯胺,也(yě)是(shì↓$π)可(kě)接受的(de)替代物(wù)。
疊氮化(huà)鈉可(kě)通(tōng)過透析或凝膠過濾從(cóng)抗 "體(tǐ)溶液中除去(qù)。IgG的(de)分(fēn☆ >→)子(zǐ)量為(wèi)150000道(d ✔↓ào)爾頓(IgM為(wèi)約600000);疊氮化(huà)鈉的(de)$δ分(fēn)子(zǐ)量為(wèi)65✔♠§₩道(dào)爾頓。截留分(fēn)子(zǐ)<↓量為(wèi)14000道(dào)爾頓的(•¥λ¥de)微(wēi)透析裝置可(kě)保留抗體(tǐ)同時(shí)使疊氮化(huà)物(wù)向φ≤♠外(wài)擴散。在保持于4℃的(de)磁性攪拌器(qì)<&<上(shàng)的(de)燒杯中,每毫升抗體(tǐ)使用(yòng)至少(shǎo)一(yī)×♣&¥升冷(lěng)PBS并攪拌透析裝置6小(xiǎo)時(shí)。更換PBS兩次,每次更換攪拌至少 σ(shǎo)6小(xiǎo)時(shí)。如(rú)有★✘(yǒu)可(kě)能(néng),所有(yǒu)材料都(dōu)應滅菌并且所得(de)¶₹≥的(de)制(zhì)備物(wù)應無菌操作(zuò)。
冷(lěng)凍/融化(huà)損傷
(1)重複冷(lěng)凍/融化(huà)循環可(kě)使抗體(tǐ)變性,導緻其形成使抗體(t•≠λπǐ)結合能(néng)力降低(dī)的(de)聚集物(wù)。
(2)保存于-20℃對(duì)于大(dà)多(♠™÷duō)數(shù)抗體(tǐ)是(shì)适當的(de);保存于-80℃無↑δ明(míng)顯優勢。冰箱不(bù)能(néng)為(wèi)無霜型。這(zhè)些(x®♥iē)冷(lěng)凍和(hé)融化(huà≥♠α)之間(jiān)的(de)循環(以減少(sh ≈ǎo)結霜)恰恰是(shì)應該避免的(de)。出于相(xiàng)同原因,抗體(t'γ≤ǐ)試劑瓶應置于具有(yǒu)最小(xiǎo)溫度波動Ω ≤的(de)冰箱區(qū)域,例如(rú)朝冰箱後部放(fàng)置而不(bù)是£λ±(shì)置于門(mén)架上(shàng)。
(3)有(yǒu)些(xiē)研究人(rén)員(yδεuán)加入冷(lěng)凍保護劑甘油達到(dào)50%的(deγ®Ω)終濃度以防止冷(lěng)凍/融化(huà∞'α)損傷;甘油可(kě)将凝固點降低(dī)至低(dī)于-20℃。雖然這(£ ↓₹zhè)對(duì)于很(hěn)多(duō)抗體(tǐ)是(shì)σσ可(kě)接受的(de),但(dàn)是(shì)隻有(yǒu)一(yī)小(xiǎo)部分✘∏(fēn)我們提供的(de)抗體(tǐ)測試了(le)在該保存條件(jiàn)下γ≈(xià)的(de)穩定性,并且我們的(de)保>≠β$證僅使用(yòng)于按數(shù)據表上↑↔•(shàng)推薦的(de)方式保存的(de)抗體™∞(tǐ)。不(bù)建議(yì)将包含甘油的(de)溶液保存于-80℃,因為(wèi)該溫度低(>•™>dī)于甘油的(de)凝固點。請(qǐn☆g)注意甘油可(kě)被細菌污染。如(rú)果加入甘油或任何冷(lěng)凍保護劑,則應當小≥§π¶(xiǎo)心操作(zuò),以得(de)到(dào)無菌制(zhì)備物(wù)。
(4)應避免抗體(tǐ)在稀釋至工(gōng)作(zuò)濃度後在4℃下(xià)保存超過一(☆πyī)天。蛋白(bái)質在高(gāo)濃度下(xià)保存時(shí↑✔→)一(yī)般不(bù)易降解,理(lǐ)×↓↑∏想的(de)濃度為(wèi)1mg/ml或更高(gāo)。這(zhè↓≥↓)是(shì)在抗體(tǐ)溶液中加入蛋白(×™εbái)質例如(rú)BSA作(zuò)為(wèi)穩定劑的(de)理(lǐ)論基礎。φ≠≤加入的(de)蛋白(bái)質也(yě)有(yǒu≈£)助于減少(shǎo)抗體(tǐ)因結合于容器(qì₽¥₩)壁上(shàng)而造成的(de)損失。對(duì)于打算(suàn§↔)進行(xíng)偶聯的(de)抗體(tǐ)而言,由于穩定蛋白(bái)質會¥(huì)與抗體(tǐ)競争,降低(dī)了(le≈α)偶聯的(de)效率,所以不(bù)應加入穩定蛋白(báiλ>δ)質。